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一、把下面的物品，按流程加入微量離心管中

1.102-105份DNA模板

2.引物各1 umol/L

3.核苷酸200 umol / L

4.1/10體積的10*PCR緩沖液

5.DdH_2O補(bǔ)充到最終卷(最終卷50-100 ml)

混合后，將反應(yīng)組分離心15秒，收集在試管底部。以上步驟僅用于實(shí)驗(yàn)研究。目前商用試劑有dNTP、10倍PCR緩沖液、引物和ddH_2O混合，反應(yīng)量為20-25 ugl。只要實(shí)驗(yàn)者把加工好的樣品加進(jìn)去就可以了。

在反應(yīng)液表面加入50-100毫升石蠟油，防止蒸發(fā)。反應(yīng)管在97℃變性10分鐘。

當(dāng)溫度低至伸長(zhǎng)時(shí)，加入1-5u Taq DNA聚合酶，離心30秒，使酶與反應(yīng)溶液充分混合。試劑酶現(xiàn)在通常添加到反應(yīng)溶液中供臨床使用。

四、PCR儀的循環(huán)程序?yàn)?94變性30秒，55退火20秒，72延伸30-35個(gè)循環(huán)。在zui的個(gè)循環(huán)結(jié)束后，將反應(yīng)管在72℃下孵育5分鐘，以確保充分延長(zhǎng)。

PCR儀也可用于擴(kuò)增組織樣本中的DNA。

在PCR檢測(cè)RNA病毒時(shí)，首先要將RNA轉(zhuǎn)化為DNA進(jìn)行擴(kuò)增，因?yàn)镻CR只能擴(kuò)增DNA模板。我們將RNA的PCR反應(yīng)稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄PCR，簡(jiǎn)稱(chēng)RT-PCR。把RNA轉(zhuǎn)化成DNA的過(guò)程叫做逆轉(zhuǎn)錄，這是通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶的作用完成的。

PCR儀使用注意事項(xiàng):

1. PCR儀應(yīng)放置在一個(gè)堅(jiān)實(shí)的水平臺(tái)上，外部電源系統(tǒng)電壓應(yīng)匹配，并需要良好的接地線(xiàn)。

2. 環(huán)境溫度和濕度分別維持在23℃和60%左右。

3. 應(yīng)配備功率大于3000W的穩(wěn)壓器。

4. 定期清潔和保養(yǎng)。5. 使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守以上步驟。