紫外分光光度計基本工作原理和紅外光譜儀相似，利用一定頻率的紫外可見光照射被分析的有機物質，引起分子中價電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜，反映了試樣的特征。在紫外可見光的范圍內，對于一個特定的波長，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測量光譜可以進行定性分析，而且根據吸收與已知濃度的標樣的比較，還能進行定量分析。
紫外分光光度計就其基本結構來說，是由五個基本部分組成的，即光源、單色器、吸收池、檢測器及信號指示系統。
1.光源
在紫外可見分光光度計中，常用的光源有兩類：熱輻射光源和氣體放電光源。
熱輻射光源用于可見光區，如鎢燈和鹵鎢燈；氣體放電光源用于紫外光區，如氫燈和氘燈。
2．單色器
單色器的主要組成：入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準直鏡等部分。
單色器質量的優劣，主要決定于色散元件的質量。色散元件常用棱鏡和光柵。
3.吸收池
吸收池又稱比色皿或比色杯，按材料可分為玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外區。吸收池的種類很多，其光徑可在0.1~10cm之間，其中以1cm光徑吸收池常用。
4、檢測器
檢測器的作用是檢測光信號，并將光信號轉變為電信號。現今使用的分光光度計大多采用光電管或光電倍增管作為檢測器。
5、信號顯示系統
常用的信號顯示裝置有直讀檢流計，電位調節指零裝置，以及自動記錄和數字顯示裝置等。
