Caspase活性測試是如何使用的？這個問題困擾了很多老師。根據我司歐陽技術的細心探討，終于得出結論。活性測試該如何使用呢？
Caspase活性測試為在細胞裂解液中檢測蛋白酶活性提供了簡捷方便的手段。當對專一Caspase的多肽底物被裂解時，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測定。將從細胞凋亡樣本得到的信號同未經誘導的對照樣本進行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數，而Caspase酶活性是同檢測到的信號直接成正比。
Caspase是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。其中Caspase-1是*可剪切IL-1?和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷，這兩個片斷可以形成異源二聚體，并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡，并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。
測定原理基于Caspase-1特異水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA)，釋放的游離硝基*pNA在405 nm有zui大吸光度。采用可見光光度比色法測定pNA而得到Caspase活性。適用于檢測哺乳動物組織、細胞Caspase-1活性。
上海勁馬生物根據樣品測定操作：
1. 按下表設置96孔板反應體系。底物zui后加入以使各管反應起始時間相同。設置不加樣品的空白對照管。酶活力不足或過高，可增加或減少樣品。
2. 蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37 ºC反應2小時，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。
3. 樣品管OD405減去空白對照OD405，為樣品Caspase水解底物產生的pNA吸光度。根據標準曲線計算其含量，并以蛋白濃度校正之。
4. 測得的Caspase酶活性表示方法有兩種。(1) Caspase活性增加的百分比：99% × 實驗處理組OD / 實驗對照組OD，簡單而可靠。(2)樣品Caspase酶活力單位/mg protein，但計算較復雜，參見說明。
反應體系參考表 (允許適當調整樣品加樣量) 無樣品 空白對照 高酶活性 樣品 低酶活性 樣品 反應緩沖液μl 95 85 60 待測樣品μl － 10 35 底物 μl 5 5 5 總體積μl 100 100 100
