轉染方法、原理及應用
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DEAE-右旋糖苷法
帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞 瞬時性轉染 相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清。
磷酸鈣法
磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞 穩定轉染,瞬時性轉染 不適用于原代細胞,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用。
電穿孔法
高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入 穩定轉染,瞬時性轉染,所有細胞 適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大,需根據不同細胞類型優化電穿孔實驗條件。
陽離子性的脂質體法
帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞穩定轉染。
瞬時性轉染,所有細胞 適用性廣,轉染效率高,重復性好但轉染時需除血清。
轉染效果隨細胞類型變化大
病毒介導法 逆轉錄病毒 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩定轉染,特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等,但攜帶基因不能太大 細胞需處分裂期,需考慮安全因素 ,腺病毒 瞬時轉染,特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞,需考慮安全因素。
Biolistic 顆粒傳遞法
將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內逐步釋放,表達瞬時性轉染 可用于:人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞。
顯微注射法
用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 穩定轉染,瞬時性轉染 轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。