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考馬斯亮藍法測定蛋白質含量

2025年06月10日 10:45:26      來源:上海勁馬實驗設備有限公司 >> 進入該公司展臺      閱讀量:34

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 中文名稱:考馬斯亮藍

英文名稱:Coomassie brilliant blue

定義:屬于三苯甲烷類染料,可與蛋白質形成較強的非共價復合體。考馬斯亮藍R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質條帶的染色;考馬斯亮藍G250是布拉德福德(Bradford)蛋白質定量試劑的主要成分。

應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科);方法與技術(二級學科)

考馬斯亮藍法測定蛋白質含量

該方法用于大多數蛋白質的定量是比較的,但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或。去污劑的濃度超過02%影響測定結果。如TritonX-100SDSNP-40等。常用于細胞骨架的檢驗。

1Bradford濃染液的配制:

100mg考馬斯亮藍G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL濃磷酸,然后,用蒸餾水補充至200mL,此染液放4℃至少6個月保持穩定。

2.標準曲線蛋白質樣本的準備:

盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品,例如測定抗體,可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的,也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg150μg/100μL之間繪制標準曲線。

3.溶解:

將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中,該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同PBS)

4.稀釋:

15用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液,如出現沉淀,過濾除去。

5.作用:

每個樣本加5mL

稀釋的染料結合溶液,作用530min。染液與蛋白質結合后,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min

6.計算:

根據標準曲線計算待測樣本的濃度。

考馬斯亮藍處理方法

 

考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合,反應快速,并且穩定,無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右,皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙。

 

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