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毛細管電泳分析對進樣技術(shù)有哪些要求?
電泳儀:為電泳提供外部電場而設(shè)計的直流電源。輸出電壓或電流或功率要求相對穩(wěn)定或按特定規(guī)則變化。常用的電泳分析方法主要有:醋酸纖維素膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、二維電泳、毛細管電泳。其中,毛細管電泳分析對采樣技術(shù)的要求非常高,采樣操作如下:
1、注射區(qū)越小越好:
無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般都小于毛細管總長度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液通過毛細管吸附進入毛細管影響性能的注射量。樣品管中的溶液至少為5μL,進樣量為1-50nL。
2、注射時間盡量短:
通常注射時間為0.5~1s。此時,附著在毛細管上的樣品量相對于吸入量可以忽略不計。
雖然毛細管電泳的進樣時間可以達到±0.1s,但毛細管插入樣品管時不可避免地會有一些溶液粘附。過短的進樣時間會影響分析的重復性。
3. 樣品預濃縮:
受毛細管總體積的限制,毛細管電泳不能像HPLC那樣增加進樣量來提高檢測靈敏度,但可以采取一些措施來提高它的濃度。
*當樣品緩沖液的電導率明顯低于電泳緩沖液的電導率(100倍以上)時,在毛細管兩端施加電壓使分子在樣品區(qū)前后形成較大的電場在樣品溶液中遷移速度更快。當這些分子到達電泳緩沖液的邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢,使樣品區(qū)變窄,增加濃度,達到濃縮的目的。
* 當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導率相同,且樣品濃度較稀,不適合進一步稀釋時,可以在進樣前吸入一些水,以達到濃縮的目的。
無論采用何種進樣方法,上述方法都可以使樣品積累和濃縮。但是,由于聚集區(qū)電位的急劇下降,該區(qū)的溫度會升高。
4、毛細管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始取樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則,會發(fā)生毛細管作用和虹吸作用,導致誤差和譜帶變寬。
5、電極不要與毛細管接觸,樣品池和緩沖池液面高度要平衡。
6. 保持系統(tǒng)盡可能恒定。因為溫度直接影響粘度,它影響恒定的注射量。
7、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液混溶,前者的離子強度應(yīng)低于后者。
8. 防止樣品溶液和緩沖液的蒸發(fā)和損失。